Enhanced BCA Protein Quantification Kit

BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強型）

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

BSA 牛血清白蛋白；BCA蛋白定量試劑盒；Bradford蛋白定量；Coomassie Brilliant Blue G250 考馬斯亮藍G250；CAS NO：979-88-4；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

BCA法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白濃度測定方法。基于雙縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu²⁺還原成Cu⁺，產(chǎn)生一種紫藍色復(fù)合物，在562nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡便、靈敏、快速、穩(wěn)定和高兼容性。

BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強型）與傳統(tǒng)方法比較，具備以下特點：1）靈敏度更高，小檢測蛋白量達到0.2μg，檢測濃度下限達到10μg/ml；2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。3）現(xiàn)性范圍寬，20-1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系；4）不受絕大部分樣品中化學(xué)物質(zhì)的影響，對于 5%以內(nèi)的SDS，Triton X-100，Tween 20、60、80具有很好的兼容性。但BCA法受螯合劑和略高濃度的還原劑影響，需確保樣品中EDTA＜10mM，DTT＜1mM，β-ME＜0.01%，以及不含EGTA。

我司提供三種規(guī)格的BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強型），酶標法分別可做500T，2500T和5000T。

產(chǎn)品組分

使用方法

1.       蛋白標準品的準備

2.       BCA工作液的配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑（A）:試劑（B）=50:1的比例配制BCA工作液，即取50份BCA試劑A和1份BCA試劑B， 充分混勻，即獲得BCA工作液。例如取5ml BCA試劑A和0.1ml BCA試劑B，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

3.       蛋白濃度的測定

注意事項

1）   蛋白標準BSA粉末溶解于蛋白標準配制液后，即獲得蛋白標準原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標準原液應(yīng)放在-20℃長期保存。

2）   待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否則待測蛋白與蛋白標準所含非蛋白成分不*，有可能導(dǎo)致測定不準確。

3）   待測蛋白和蛋白標準加入BCA工作液后，如果發(fā)現(xiàn)檢測效果不佳，可以室溫放置2h或60℃放置30min，顏色會隨著時間的延長不斷加深。顯色反應(yīng)也會隨溫度升高而加快。如果濃度較低，可以適當(dāng)延長孵育時間或在較高溫度下孵育。

4）   測定標準曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化，可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)（詳見資料-BCA法的兼容性）。

5）   建議每次測定都做標準曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。

6）   如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大BCA工作液的用量使總體積不小于小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應(yīng)按比例放大。

7）   為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)加熱，但是切勿過熱，否則易失效。

8）   BCA法檢測樣本中不應(yīng)含有EGTA，否則影響檢測結(jié)果。

9）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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