SYTOX Green Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO)

死細胞綠色熒光核酸染料

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

SYTOX Green；SYTOX 9；碘化丙啶 PI；死細胞染料綠菁；熒光增白劑28；Calcofluor White M2R；CFW；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

SYTOX Green核酸染料（SYTOX Green Nucleic Acid Stain），是一種高親和力的核酸染料，輕易滲透進入受損的細胞質(zhì)膜，但不能穿透活細胞膜。特別適用于革蘭氏陽性菌（G⁺）和革蘭氏陰性菌（G^-），由于它們需要極其明亮的熒光信號。探針只需簡單孵育，使用氬離子激光器的488nm激光或任何其它450-490nm光源激發(fā)，死細胞的核酸則呈明亮的綠色熒光。結(jié)合以上特征，以及熒光增強＞500倍（與核酸結(jié)合）的優(yōu)點，使其稱為一種簡單、定量的一步法死細胞指示劑，當(dāng)用熒光顯微鏡、熒光光度計、熒光酶標(biāo)板和流式細胞儀檢測。

SYTOX Green核酸染料可與藍色和紅色熒光的表面標(biāo)記聯(lián)合使用，用于多指標(biāo)分析。也能將SYTOX Green與任一種具細胞滲透性的SYTO 59-64紅色熒光核酸染料聯(lián)合雙色標(biāo)記死細胞和活細胞。SYTOX Green是一種優(yōu)秀的DNA復(fù)染劑，用于染色體標(biāo)記以及固定細胞和組織的染色。

本品以DMSO儲存液形式提供，濃度為5mM。只需用合適的生理緩沖液稀釋到工作濃度進行簡單孵育即可。適用于哺乳動物細胞、革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌。

產(chǎn)品特性

1） 同義名：SYTOX Green dye；SYTOX Green死細胞染料；死細胞染料綠菁；SYTOX Green細胞核染料；

2） 外觀：橙色至紅色溶液

3） 熒光特征：E_X/E_m=504/523nm（與DNA結(jié)合），熒光產(chǎn)量為0.53（圖1），需注意細菌或哺乳動物細胞中SYTOX Green的光譜特征可能發(fā)生變化。

圖1. SYTOX Green與DNA結(jié)合的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜。于10mM Tris-HCl，1mM EDTA, pH 7.5
的反應(yīng)體系內(nèi)，將1個染料分子與50個DNA堿基對結(jié)合之后檢測所得的光譜。

保存與運輸方法

保存:-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

運輸：冰袋運輸。

應(yīng)用示例
文獻來源1）A Double Staining Method Using SYTOX Green and Calcofluor White for Studying Fungal Parasites of Phytoplankton Mélanie Gerphagnon, Delphine Latour, Jonathan Colombet, Télesphore Sime-Ngando Applied and Environmental Microbiology Jun 2013, 79 (13) 3943-395
實驗?zāi)康模?/span>利用二種熒光染料（CFW+ SYTOX green）雙重標(biāo)記來定量檢測孢子囊內(nèi)的游動孢子含量。
實驗方法：首先，用經(jīng)典的核酸染料DAPI（1 μg/ml?1）和特異性染色質(zhì)熒光素增白劑（calcofluor white , CFW, 2.5% v/v）。之后，結(jié)合核酸染料SYTOX green和CFW染色。SYTOX green的不同濃度（0.1 μM, 0.2 μM, 和0.5 μM）和孵育時間（30 min，1 h）進行優(yōu)化。CFW工作濃度為2.5% (vol/vol) 。CFW要么與SYTOX green同時加入樣本，或觀察前5min再加入樣本。染色步驟和結(jié)果總結(jié)見圖1。的染色條件是：先用0.1 μM SYTOX green 孵育55min，再加入CFW共同孵育5min。

Fig 1. Different concentration and incubation time procedures tested for double staining method and epifluorescence microscopy observation of zoosporic content and sporangia of phytoplankton parasitic chytrid. Optimal procedures are indicated with bold characters. Bars, 10 μm.

文獻來源2）Johnson MB, Criss AK. Fluorescence microscopy methods for determining the viability of bacteria in association with mammalian cells. J Vis Exp. 2013;(79):50729.
實驗?zāi)康模?/span>使用SYTOX Green和DAPI來評估細菌活力。
實驗方法：用DAPI (10 μg/ml in Morse's Defined Medium)室溫避光標(biāo)記細菌20min；用標(biāo)記好*-的細菌感染24孔板內(nèi)貼壁培養(yǎng)的細胞，不要用醛或有機溶劑來固定細胞；用MOPS/MgCl2清洗一次；用Alexa Fluor 647結(jié)合的抗體或凝集素標(biāo)記感興趣的細菌，室溫避光操作10min，來檢測外部細菌；吸走細胞培養(yǎng)基，加入SYTOX Green（0.4 μM in MOPS/MgCl2）。室溫避光孵育5min。MOPS/MgCl2清洗2次；MOPS/MgCl2再清洗1次；于30min內(nèi)用熒光顯微鏡收集圖片。

Fig 2. (A-B) Mid-logarithmic phase N. gonorrhoeae was exposed to propidium iodide and SYTO9 as in protocol 1, with (A) or without (B) isopropanol treatment to kill the bacteria. Nonviable bacteria are accessible to propidium iodide and appear red. Viable bacteria are stained with SYTO9 and appear green. (C-D) Mid-logarithmic phase N. gonorrhoeae was exposed to DAPI and SYTOX Green as in protocol 2, with (C) or without (D) isopropanol treatment to kill the bacteria. Nonviable bacteria are accessible to DAPI and SYTOX Green and appear blue + green. Viable bacteria are stained with DAPI only and appear blue only.

染色流程（更多內(nèi)容見說明書）

以下步驟適用于任何細胞類型，需注意不同細胞類型所需的探針工作濃度范圍有差異（見表2）。生長培養(yǎng)基、細胞密度、是否存在其它細胞、和其它因素都可能影響染色。總的來說，不在磷酸鹽的緩沖液中能得到最*-好*=的結(jié)果。玻璃器皿上殘留的去污劑也有可能影響許多有機體的真實染色，導(dǎo)致含或不含細胞的溶液中都能發(fā)現(xiàn)明亮熒光的材料。確保用溫和去污劑來清洗玻璃器皿，用熱自來水完*-全沖洗干凈，最后用去離子水清洗數(shù)次。

注意事項

1） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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SYTOX Green 死細胞綠色熒光核酸染料

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